Luitenant Mannion heeft barman Quill vermoord, omdat die zijn vrouw Laura zou hebben verkracht. Mannion doet beroep op de geslepen advocaat Beigler om hem te verdedigen. Deze laatste voert aan dat Mannion toegaf aan een  onweerstaanbare drang.
Maar dan maakt Laura haar entree... Preminger dwingt ons, het publiek, in de rol van jury en lijkt op een superieur ironische en sceptische toon te willen zeggen dat een rechtszaak, zeker in de V.S., een spel is of een toneelstuk, waarbij de beste acteurs het halen. Anatomy was de eerste mainstream-Hollywoodfilm waarin openlijk over seks en verkrachting werd gesproken. Premingers koele, kristalheldere regie kwam zelden beter tot zijn recht en wat zijn cast hier presteert is simpelweg briljant. Anatomy of a Murder is een van de eerste films met een volledige jazzsoundtrack – de muziek werd gecomponeerd door Duke Ellington en Billy Strayhorn en gespeeld door Ellingtons orkest.
Verschillende van Ellingtons bandleden zijn duidelijk door heel de film te horen: Johnny Hodges, Paul Gonsalves, Harry Carney, Russell Procope en William ‘Cat’ Anderson, en de Duke zelf is heel even te zien als Pie-Eye, eigenaar van een wegrestaurant met wie advocaat Biegler (Stewart) een nummertje op de piano speelt.